аЯрЁБс>ўџ ,/ўџџџ-џџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџьЅС‰@ №ПК jbjbq”q” šііКџџџџџџlЂЂЂЂЂЂЂввввв о в…ъіііііQQQBDDDDDD,o ЮpЂQ/"QQQpЂЂіі9іQŽЂіЂіBЖФЂЂЂЂQBšГЂЂ6ъ ђЇˆНввп:&6 …….] ] 6УхX-Gal staining (before whole-mount in situ hybridization) Dispense 4ml of MEMFA to each vial and transfer embryos to vials. 10x MEM salt 5 ml Formaldehyde solution 5 ml DW 40 ml Fix embryos for 1 hr with MEMFA. After fixation, embryos should be rinse and stored in PBS at RT or 4(C at least for 1 hour. Do not store embryos in EtOH. EtOH will kill the (-galactosidase activity. Prepare X-Gal staining buffer. 0.2M Na2HPO4 1.8 ml 720 ul 1.08 ml 0.2M NaH2PO4 0.7 ml 280 ul 420 ul 4M NaCl 1.8 ml 720 ul 1.08 ml 1M MgCl2 50 ul 20 ul 30 ul 50mM K3(FeCN6) 3.05 ml 1.220 ml 1.83 ml 50mM K4(FeCN6) 3.05 ml 1.220 ml 1.83 ml H2O 39.55 ml 15.82 ml 23.73 ml  Total 50 ml 20 ml 30 ml (Check pH is ~7.2 with paper.) After 1hr of fixation, replace MEMFA with 3ml of X-gal staining buffer and incubate for 10~15 minutes. Meanwhile, prepare X-gal staining solution. (Mix 100 ~ 200ul of X-gal stock with 3ml of buffer.) Dispense 2 ml of X-gal staining solution to each well of 12-well plate. Transfer embryos from vials to wells. Incubate for an appropriate time (15min~5hr). After staining, transfer embryos to 2.5 ml of MEMFA and re-fix for 1hr. Transfer embryos to 100% EtOH and invert several times to de-hydrate embryos. Repeat this three times and store at -20(C. :uvОП  В Г К ћїѓьї jUmH jb№ jА№5CJ :;}­ииїBŽп2 x О  e  Ž ѕ W Ÿ Х ѓ < З И Й К њјѓјјјѓѓјјјјјјјјјјѓѓѓѓѓѓѓјјј & F$a$:;}­ииїBŽп2 x О  e  Ž ѕ W Ÿ Х ѓ < З И Й К ќі№ъфоивЬЦФ                           Аа/ Ар=!А"А# $ %А|,, йќџџƒ c yg(ќ,,и(d'` i4@ёџ4NormalCJOJPJQJmH <A@ђџЁ<Default Paragraph FontК џџ z™КК К К №8№@ёџџџ€€€ї№№№№Ž№( №§ћџћ №№VB № C №DПџ"ёП€№№№B №S №ПЫџ ?№Кˆ``tРЭ/1z|ŠŒЁЬЮ/1UYИИМCF‰ŒИИМ:::џџ Kristen KrollNclyde-frog:Desktop Folder:s.seo:protocols and database:X-gal staining protocol Seongjin Seo_clyde-frog:Users:clyde_frog:Desktop:ss:protocols and database:protocols:X-gal staining protocol џџџџџџџџџ„h„˜ўЦh^„h`„˜ўo(.џџџџџџџџМџ@€ИИŒТЃИЗэ!К` @GTimes New Roman5€Symbol3 Arial3Times"1ˆ№аhpьu†Ѓ+ŠFЇьu†:ф Y№ЅРДД€0d=ЗP№пџџ9X-Gal staining (before whole-mount in situ hybridization) Kristen Kroll Seongjin Seoўџ р…ŸђљOhЋ‘+'Гй0Ќ˜мш  4@ \ h t €Œ”œЄ':X-Gal staining (before whole-mount in situ hybridization)t-GaKristen Kroll (risNormal  Seongjin Seo (3onMicrosoft Word 10.1@м=@BГz;&У@PЬZ4&У@ЪgЋФфўџ еЭеœ.“—+,љЎ0H hpЄЌДМ ФЬдм ф *')Washington University School of Medicineho = :X-Gal staining (before whole-mount in situ hybridization) Title ўџџџўџџџўџџџ !"#$%&ўџџџ§џџџ)ўџџџўџџџўџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџRoot Entryџџџџџџџџ РF§†шЊФ+€1TableџџџџџџџџWordDocumentџџџџџџџџšSummaryInformation(џџџџDocumentSummaryInformation8џџџџџџџџџџџџCompObjџџџџџџџџџџџџXџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџўџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџўџџџџџ РFMicrosoft Word DocumentўџџџNB6WWord.Document.8Root Entryџџџџџџџџ РFПвъ‚4Х6@1TableџџџџWordDocumentџџџџџџџџ9SummaryInformation(џџџџ9мџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџўџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџ.§џџџўџџџўџџџ12345708ўџџџ:;<=>?@ABCDEFGўџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџDocumentSummaryInformation8џџџџџџџџџџџџ3xCompObjџџџџџџџџџџџџX0Tableџџџџџџџџџџџџ џџџџџџџџџџџџўџџџ  !"#$%&'()*+,-./012ўџџџ45678ўџџџ:;<=>?@ўџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџР!uЏџР!ƒHР!uЏР!uЏР!uЏР!uЏР!uЏР!uЏР!uЏР!uЏР!uЏР!uЏР!uЏР!uЏР!uЏР!uЏР!uЏР!uЏР!uЏџР!ќ{Р!uЏР!uЏР!uЏѕeЦЧЪœ€€˜ 0€€œ€€˜0€€œ€€Ж К К џџUnknown Seongjin Seo Kristen KrollK. KrollС1СФЩ John Bradley№8№@ёџџџ€€€ї№№№№Ž№( №§ћџћ №№VB № C №DПџ"ёП€№№№B №S №ПЫџ ?№Шˆ``tРЭ/1z|ŠŒЁЬЮ/1cgЪCF‰ŒЪ:::џџ Kristen KrollNclyde-frog:Desktop Folder:s.seo:protocols and database:X-gal staining protocol Seongjin Seo_clyde-frog:Users:clyde_frog:Desktop:ss:protocols and database:protocols:X-gal staining protocol џџџџџџџџџ„h„˜ўЦh^„h`„˜ўo(.џџџџџџџџЪџ@€єя ŠŠэ!4@NЧШ0 @1š0€@0r@GTimes New Roman5€Symbol3 Arial3Times"qˆ№аhpьu†Oь“FЇьu†@ф Y№ЅРДД€20d=ХP№пџџ9X-Gal staining (before whole-mount in situ hybridization) Kristen Kroll Seongjin Seoўџ еЭеœ.“—+,љЎ0H hpЄЌДМ ФЬдм ф *')Washington University School of Medicineho = :X-Gal staining (before whole-mouўџџџџџ РFMicrosoft Word DocumentўџџџNB6WWord.Document.8 i4@ёџ4NormalCJOJPJQJmH <A@ђџЁ<Default Paragraph FontШ џџ z™Ш:;}­ииїBŽп2xОeŽѕe­гJХЦЧЪР! "Р!uЏР!uЏР!uЏР!uЏnt in situ hybridization) Titleўџ р…ŸђљOhЋ‘+'Гй0Ќ˜мш  4@ \ h t €Œ”œЄ':X-Gal staining (before whole-mount in situ hybridization)t-GaKristen Kroll (risNormal  Seongjin Seo (4onMicrosoft Word 10.1@€б№@ЊwмC&У@ИМ<&У@2)!Е4ХфьЅС‰@ єПК jbjbq”q”ііШџџџџџџlЂЂЂЂЂЂвФ  –GъЌЌЌЌЌртттттт,1 Q Ю9Ђх"ЗЂЂЌЌ9,€ЗЗЗ‚ЂЌЂЌрЗЖФЂЂЂЂрЗšЗQЌЂЂд  ’oО–r‰.Фд GGЬ З дЗУхX-Gal staining (before whole-mount in situ hybridization) Dispense 4ml of MEMFA to each vial and transfer embryos to vials. 10x MEM salt 5 ml Formaldehyde solution 5 ml DW 40 ml Fix embryos for 1 hr with MEMFA. After fixation, embryos should be rinse and stored in PBS at RT or 4(C at least for 1 hour. Do not store embryos in EtOH. EtOH will kill the (-galactosidase activity. Prepare X-Gal staining buffer. 0.2M Na2HPO4 1.8 ml 720 ul 1.08 ml 0.2M NaH2PO4 0.7 ml 280 ul 420 ul 4M NaCl 1.8 ml 720 ul 1.08 ml 1M MgCl2 50 ul 20 ul 30 ul 50mM K3(FeCN6) 3.05 ml 1.220 ml 1.83 ml 50mM K4(FeCN6) 3.05 ml 1.220 ml 1.83 ml H2O 39.55 ml 15.82 ml 23.73 ml  Total 50 ml 20 ml 30 ml (Check pH is ~7.2 with paper.) After 1hr of fixation, replace MEMFA with 3ml of X-gal staining buffer and incubate for 10~15 minutes. Meanwhile, prepare X-gal staining solution. (Mix 100 ~ 200ul of X-gal stock with 3ml of buffer.) Dispense 2 ml of X-gal staining solution to each well of 12-well plate. Transfer embryos from vials to wells. Incubate for an appropriate time (15min~5hr). After staining, transfer embryos to 2.5 ml of MEMFA and re-fix for 1hr. Transfer embryos to 100% EtOH and invert several times to de-hydrate embryos. Repeat this three times and store at -20(C. :uvОП  В Г К Жћїѓьї jUmH jb№ jА№5CJ :;}­ииїBŽп2 x О  e  Ž ѕ W Ÿ Х ѓ < З И Й К њјѓјјјѓѓјјјјјјјјјјѓѓѓѓѓѓѓјјј & F$a$:;}­ииїBŽп2 x О  e  Ž ѕ W Ÿ Х ѓ < З И Й К ќі№ъфоивЬЦФ                           Аа/ Ар=!А"А# $ %А|,, йќџџƒ c yg(ќ,,и(d'` (2%, 20mg/ml)